尹锐志14岁入嵊县爱华女学堂读书，为革命党人通风报信，并参加光复会。入会第二年为反抗包办婚姻离家出走，携妹尹维峻到绍兴，进明道女学堂读书，深得秋瑾赏识，曾派到上海光复会秘密联络机关锐进学社工作。秋瑾主持大通学堂后，派其和竺绍康等回嵊县联络会党，谋划接应事宜。徐锡麟、秋瑾皖浙举义失败以后，被通缉，流亡上海，以卖报为掩护，与姚勇忱、王金发等秘密开展革命活动，次年夏回绍兴办女学，协同王金发处死杀害秋瑾的谋主胡道南。

清宣统元年（1909年），率领暗杀小组成员十多人从上海赴北京，计划暗杀清廷要员，伺机一年，未果而返。在陶成章指导下与尹维峻在上海法租界平济路良善里重组锐进学社，发行《锐进学报》，作为光复会在上海的总机关。武昌起义后，上海光复，11月4日晚同张伯歧等率领敢死队赴杭州，进攻浙江抚署，与起义新军协同作战，迅速占领抚署衙门。为支援攻打南京，赶制炸弹，不慎爆炸，后脑受伤，由尹维峻率女子荡宁队（亦称女子先锋队），参加江浙沪联军会攻南京。在占领雨花台、强登中华门战役中，尹维峻身先士卒，受通令嘉奖。中华民国建立以后，姐妹两人均被任命为总统府顾问。

1913年，赴北京探亲，袁世凯企图笼络收买，被尹锐志拒绝。1916年，与浙江同乡、光复会成员周亚卫结婚。1917年周亚卫被选送入日本陆军大学学习，尹锐志同往。抗战期间在重庆先后担任妇女工作队副队长，抗日军工烈属工厂厂长，积极参与抗日救亡活动。抗战胜利后，蒋介石为掩饰其独裁统治，表面上允许各党派并存，尹锐志与周亚卫、童杭时等人在重庆重建光复会，自任会长。